ELISA實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞樣本的收集和處理方法

細(xì)胞上清

需保證各組間培養(yǎng)細(xì)胞的數(shù)量基本一致，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好。建議采用6孔板培養(yǎng)細(xì)胞，并保證細(xì)胞數(shù)量達(dá)到106左右，即細(xì)胞密度達(dá)70%-80%左右，即可收集培養(yǎng)液，于2-8℃、1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片，取上清檢測(cè)。

細(xì)胞裂解液

貼壁細(xì)胞用冷的PBS輕輕清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g離心5分鐘后收集細(xì)胞；懸浮細(xì)胞可直接離心收集。收集的細(xì)胞用冷的PBS洗滌3次。每106個(gè)細(xì)胞中加入150-200μL PBS重懸（推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑；若含量很低，可減少PBS的體積），并通過(guò)反復(fù)凍融或超聲，使細(xì)胞破碎。將提取液于2-8℃、1500×g離心10分鐘，取上清檢測(cè)。

■ 反復(fù)凍融：-80℃放置1h/液氮放置0.5h，然后置于30℃水浴鍋中，輕微振蕩，使其迅速融化，此操作反復(fù)2-3次即可。

■ 超聲方法：用超聲波發(fā)生器，以振幅14μm超聲處理30 s，在冰水浴條件下，破碎細(xì)胞；或者使用超聲波破碎儀，200 W，2 s/次，間隙3 s，總時(shí)間5 min。

樣本中建議提前加入蛋白酶抑制劑，常規(guī)推薦PMSF：工作濃度:17~174μg/mL(0.1~1mM)。

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，有許多條件需要摸索，包括細(xì)胞類(lèi)型、培養(yǎng)基組分、細(xì)胞數(shù)量、生產(chǎn)狀態(tài)、干預(yù)條件和物質(zhì)等。前期基礎(chǔ)打得牢固，對(duì)后續(xù)ELISA或其他種類(lèi)實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展，及結(jié)果的分析，具有更多的參考意義。

ELISA實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞樣本的收集和處理方法