噻唑蘭MTT的正確配置方法

上海信帆生物供應(yīng)噻唑蘭MTT，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，價格低廉！

稱取25mg MTT粉末溶解在5mg/ml的工作液，4℃保存。一周內(nèi)使用。

產(chǎn)品參數(shù)

其它名稱：噻唑蘭；噻唑藍溴化四唑；3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide

298-93-1

分子式：C18H16BrN5S          

分子量：  黃色至橙色粉末

純度：  >98%

溶解性：溶于水(20 mg/ml)，緩沖鹽溶液(5 mg/ml)

結(jié)構(gòu)式：

噻唑蘭（MTT是一種可接受氫離子的化合物染料，帶正電荷，具有細胞膜滲透性。活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠催M入的MTT-甲臜結(jié)晶，而死細胞不具有此功能。甲臜結(jié)晶是不能穿透細胞膜，因此沉積在處于增殖且未受損傷的細胞內(nèi)。甲臜結(jié)晶可用570 nm的吸光度反映甲臜的生成量。而甲臜的生成量與活細胞數(shù)目成正比，用以評估細胞存活狀況。

使用方法：

1：接種細胞：用含10％胎牛血清的培養(yǎng)基配制單個細胞懸液，以每孔1000-10000個細胞量接種到96孔板，每孔體積200ul。

2: 培養(yǎng)細胞：正常培養(yǎng)及加藥等處理細胞。

3：呈色：培養(yǎng)及處理完畢后，PBS清洗每孔細胞后，每孔加MTT溶液20ul（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)，繼續(xù)培養(yǎng)箱孵育4 h。

4： 終止培養(yǎng)：小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮細胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10min，使結(jié)晶物充分融解。

5：比色：490nm酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制細胞生長曲線。

噻唑蘭MTT的正確配置方法